Tanis mengungkap bahwa Markus adalah vampir pertama, putra dari Alexander Corvinus, makhluk abadi pertama.
Markus berubah menjadi vampir setelah digigit kelelawar, sementara William menjadi manusia serigala setelah digigit serigala.
Putra ketiga tetap manusia dan menurunkan garis keturunan manusia abadi — salah satunya adalah Michael, yang kini menjadi hibrida pertama vampir-Lycan.
Tanis juga mengungkap bahwa ayah Selene adalah arsitek penjara William, dan liontin itu adalah kuncinya.
Karena itulah Viktor membunuh keluarga Selene agar rahasia lokasi penjara tetap tersembunyi, lalu mengubah Selene menjadi vampir dengan ingatan tentang lokasi itu tersimpan dalam darahnya.
Markus kemudian membunuh Tanis setelah meminum darahnya untuk mengetahui keberadaan Selene.
Saat Selene dan Michael menemui Macaro, terungkap bahwa ia adalah Alexander Corvinus, leluhur semua vampir dan Lycan.
Alexander menolak ikut campur, namun Markus datang dan menyerangnya. Ia meminum darah Selene untuk mengetahui lokasi penjara William, lalu membunuh ayahnya demi mendapatkan setengah liontin lainnya.
Sebelum mati, Alexander meminta Selene meminum darahnya agar memperoleh kekuatan baru.
Selene pun menjadi lebih kuat dan mampu menyembuhkan diri layaknya hibrida. Ia lalu memimpin tim Alexander menuju lokasi penjara William untuk menghentikan Markus. Namun Markus sudah lebih dulu membebaskan saudaranya.
Dalam pertarungan sengit, Michael yang semula disangka tewas bangkit kembali, melawan William dan membunuhnya.
Sementara itu, Selene menewaskan Markus dengan mendorongnya ke baling-baling helikopter yang jatuh.
Setelah pertempuran usai, Selene menyadari darah Alexander telah memberinya kemampuan baru — ia kini menjadi vampir pertama yang kebal terhadap sinar matahari.
Review
Film ini melanjutkan kesuksesan film pertamanya yaitu Underworld serta bagian kepingan dari film Van Helsing.